细胞实验（一）基本操作
以下是悬浮细胞（如淋巴细胞、某些肿瘤细胞系）的 复苏、传代、换液、冻存 基本操作步骤及注意事项： 一、细胞复苏目的快速恢复冻存细胞的活性。 步骤 准备 预热完全培养基至37℃，离心机预冷至4℃。 水浴锅预热至37℃。 解冻 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴，轻轻摇晃至完全解冻（约1-2分钟）。 清洗 将细胞悬液转移至15ml离心管，加入5ml预冷的完全培养基（中和DMSO毒性）。 4℃、200×g离心5分钟（即低速离心机1000rpm），弃上清。 重悬与接种 用适量完全培养基轻柔重悬细胞，计数后接种至培养瓶/皿。 放入37℃、5% CO₂培养箱，24小时后观察细胞状态。 注意事项 操作迅速，避免反复冻融。 初次复苏建议培养基中加1-2倍双抗（防止污染）。 二、细胞传代目的维持细胞生长密度，防止过度堆积。 步骤 收集细胞 轻摇培养瓶使细胞均匀悬浮，将细胞悬液转移至离心管。 室温、200×g离心5分钟，弃上清。 计数与稀释 ...
免疫组化（三）imageJ使用分析
上一篇内容我们讲述了如何使用SlideViewer进行截图，当我们获取了一张组织切片的图像后，需要借助软件量化，以确定某蛋白在组织学层次的表达水平。 使用ImageJ对组化结果进行分析的经验总结（2024.9.27） 1. ImageJ软件与IHC Profiler插件的安装1.1 ImageJ下载与安装 下载链接：https://imagej.nih.gov/ij/downl 安装步骤：根据官网指引完成安装（如下图）。 1.2 IHC Profiler插件安装 插件下载链接：https://sourceforge.net/projects/ihcprofiler 插件安装步骤： 将IHC Profiler文件夹放入ImageJ的Plugins目录。 重启ImageJ。 宏安装步骤： 将IHC_Profiler.txt文件放入ImageJ的macros文件夹。 点击菜单栏：Plugins > Macros > Install，选择该宏文件。...
免疫组化（一）基本步骤和原理
免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）是一种通过抗原-抗体特异性结合原理，在组织切片中定位目标蛋白的技术。 以下是其基本步骤及关键要点： 1. 样本制备 取材与固定 快速取新鲜组织，切成适当大小（通常≤5mm厚）。 立即浸泡于固定液（如4%中性缓冲甲醛）中，固定时间依组织类型而定（通常6-24小时）。 目的：保持组织形态，防止抗原降解。 脱水与包埋 梯度酒精脱水（70%~100%乙醇），二甲苯透明，浸蜡包埋成蜡块。 注意：过度脱水可能破坏抗原表位。 2. 切片与贴片 切片 用切片机将蜡块切成3-5μm薄片，贴附于防脱载玻片上。 关键：避免切片折叠或破损。 烤片 60-65℃烘箱中烤片1-2小时，增强组织与玻片粘附性。 3. 脱蜡与水化 脱蜡 二甲苯浸泡（2次×10分钟），去除石蜡。 水化 梯度酒精（100%→95%→80%→70%→50%→水）逐步复水至PBS。 目的：恢复组织含水状态，便于后续反应。 4. 抗原修复 必要性 ...
大三下第4周周记：时间都去哪儿了？
复盘反思上周状态只能打50分，堆积了很多任务。包括这篇周记，本应该是周日晚写的，也拖到了现在。 人际关系： 1、与老师交流沟通两次（发邮件的技巧） 2、与fjw深入沟通两次（如何落实） 学习科研： 1、答辩一次 2、组会一次 3、动物实验一次 运动锻炼：跑步两次。 其他技能： 阅读书籍7h。 不足：1、任务先后级把握不好，形式化的事情上耗时太久 2、没有早八的时候前一晚不好好睡觉，午休又太久 3、心态不好，还是会焦虑，自我怀疑 改进：1、调整睡眠 2、不要对自己太宽容，今日事今日毕，不重要的事情不要耗时太久（PBL的PPT、抄写任务、日常查看） 3、拿笔写字，多思考 4、积极自我暗示 本周规划 无需多言，加油，这周末一定一定要出去玩！！
大三下第3周周记：午夜降临前抵达
复盘反思这周终于步入学习正轨，发现了一个待办规划+个人笔记库软件，叫做notion。很不错。 基本情况：人际关系： 1、帮助朋友若干次；与同学联系若干次。（友谊天长地久） 2、帮助同校考研学长一次——如何合理利用人脉而不招致反感。（主动的力量） 3、与fjw沟通多次；让妈妈开心若干次。（我永远爱我的家人们） 4、处理复杂人际关系一次——如何表达感谢而是对方欣然接受。（语言的艺术） 学习科研： 生信学习对我来说是难点，所以经常在上面一耗耗很久。 下周要注意把生信学习安排在自习中段，适可而止，又不至于抵触。 运动锻炼：跑步一次，核心两次。 其他技能： 理财投资入门学习1次；阅读书籍13h。 不足：1、计划有时不能按时完成。 2、通勤太占用时间，见习课和PBL习得感弱。 3、一直在无纸化学习，不利于记忆和理解 做的好的地方：1、有序规划，比漫无目的的努力强。 2、整体情绪比较好。 下周规划简单写了一下，具体在notion里面列。 以上。 加油加油！周末我要去踏青嘿嘿
删了吧我有个朋友破防了
哥删了呗，我是无所谓的，但是我一个朋友可能有点汗流浃背了，他不太舒服想睡了，当然不是我哈，我一直都是行的，以一个旁观者的心态看吧，也不至于破防吧，就是想照顾下我朋友的感受，他有点破防了，还是建议删了吧，当然删不删随你，我是没感觉的，就是为朋友感到不平罢了，也不是那么简单破防的。 终于把我对自己写作的感受描述出来了。
理旧物执念始了结
好久不见。说来惭愧，自从放假至今，几乎未曾更新过blog。 再年轻一点的时候，书写过许多纸质品，它们被安放在一个不大的储物箱内，我每个假期都拿出来整理回看，已成惯例。此次回家又翻看了些，坦白讲，那些曾自诩呕心沥血、饱集才情的文字们谈不上有趣，更远非深刻，因定时翻阅，也没什么新鲜感。稍有新意的是一封十四岁写给二十岁的信，和一篇关于“戒网瘾集中营”的小说片段，一沓从书中摘下的纸页，以及友人曾赠予我的几枚小物件，可能是此前没看到过的缘故。 再过上一年、两年，甚至到三年、五年、十年，我回头看今日在键盘上敲打下的这些文字，兴许也会有同感吧。 之一2月4日 ...
